武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品: 檢測(cè)
上海動(dòng)物組織原位雜交-湖北動(dòng)物組織原位雜交
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經(jīng)營(yíng)模式
生產(chǎn)加工
所在地區(qū)
湖北省武漢市
主營(yíng)產(chǎn)品
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司主營(yíng):動(dòng)植物,細(xì)菌,細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)
FISH是原位雜交技術(shù)大家族中的一員,因其所用探針被 熒光物質(zhì)標(biāo)記(間接或直接)而得名,該方法在80年代末 被發(fā)明,現(xiàn)已從實(shí)驗(yàn)室逐步進(jìn)入臨床診斷領(lǐng)域。基本原理是 熒光標(biāo)記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火 溫度下復(fù)性;通過(guò)熒光顯微鏡觀察熒光信號(hào)可在不改變被分析對(duì)象(即維持其原位)的前提下對(duì)靶核酸進(jìn)行分析。DNA熒光標(biāo)記探針是其中較常用的一類核酸探針。利用此探針可對(duì)組織、細(xì)胞或染色體中的DNA進(jìn)行染色體及 基因水平 的分析。熒光標(biāo)記探針不對(duì)環(huán)境構(gòu)成污染,靈敏度能得到保障,可進(jìn)行多色觀察分析,因而可同時(shí)使用多個(gè)探針,縮 短因單個(gè)探針?lè)珠_(kāi)使用導(dǎo)致的周期過(guò)程和技術(shù)障礙。
原位雜交技術(shù)基本原理
原位雜交技術(shù)的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基序列,將有放6射性或非放6射性的外源核酸(即探針)與組織、細(xì)胞或染色體上待測(cè)DNA或RNA互補(bǔ)配對(duì),結(jié)合成專一的核酸雜交分子,經(jīng)一定的檢測(cè)手段將待測(cè)核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來(lái)。
為顯示特定的核酸序列必須具備3個(gè)重要條件:組織、細(xì)胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補(bǔ)的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標(biāo)記物。
雜交流程
雜交液的成分主要影響了核酸雜交的復(fù)性動(dòng)力學(xué)和熱穩(wěn)定性。雜交液的基礎(chǔ)成分為:Denhardt’s溶液(Ficoll,BSA,PVP),異源核酸(如鯡精3子DNA/tRNA/競(jìng)爭(zhēng)DNA),磷酸鈉,EDTA,SDS,鹽離子,甲酰胺和硫酸葡聚糖,以及雜交探針。不同的應(yīng)用中進(jìn)行雜交溫度、pH、鹽離子、甲酰胺、探針濃度等條件的優(yōu)化。常用的pH范圍為6.5~7.5,較高的pH值有助于提高雜交的嚴(yán)謹(jǐn)性。