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主營(yíng)產(chǎn)品: 科研試劑, elisa試劑盒, 染色液, 抗體試劑, 免疫學(xué)檢測(cè)服務(wù), 特殊染色服務(wù), 核酸檢測(cè)服務(wù), 生化測(cè)定服務(wù), ELISA試劑盒定制化服務(wù), 抗體定制化服務(wù), 緩沖液定制化服務(wù)
普利萊-人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體TFR/CD71ELISA試劑盒-Human-Transferrin
價(jià)格
訂貨量(T)
¥1600.00
≥48
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?普利萊 人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒 (Human Transferrin Receptor/TFR ELISA Kit) 貨號(hào):AZ0149
原理:本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù)。特異性抗大鼠抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本,經(jīng)過(guò)孵育,樣本中存在的抗原與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后,加入生物素化的檢測(cè)抗體孵育。洗滌去除未結(jié)合的生物素化的抗體,加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素 (Streptavidin HRP) 。洗滌后,加入信號(hào)增強(qiáng)劑孵育,洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后,再次加入 Streptavidin HRP 。洗滌后,加入顯色底物TMB,避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中TNFα的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng),在450nm波長(zhǎng)(參考波長(zhǎng)570 -630 nm)測(cè)定吸光度值。
組成:試劑盒保存于2-8℃,有效期標(biāo)注于標(biāo)簽上。只有恰當(dāng)保存的試劑才是有保證的。如果試劑盒的組分需要再次使用,請(qǐng)確保上一次使用之后沒有被污染。
組分 | 規(guī)格 | 規(guī)格 | 保存溫度 |
預(yù)包被酶標(biāo)板 | 48T | 96T | 4°C |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 1vial | 2vials | -20°C |
檢測(cè)抗體 | 1vial | 1vial | 4°C |
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素 | 1vial | 1vials | 4°C |
10×檢測(cè)緩沖液 | 15ml | 15ml | 4°C |
顯色底物TMB | 6ml | 11ml | 4°C |
終止液 | 11ml | 11ml | 4°C |
20×洗液 | 50ml | 50ml | 4°C |
封板膜 | 6個(gè) | 6個(gè) | 常溫或4°C |
檢測(cè)步驟
1. 樣本采集與貯存
細(xì)胞培養(yǎng)上清
300 ×g離心10分鐘去除沉淀物,即刻檢測(cè),或者分裝,-20℃以下貯存。
血清樣本
離心管收集血清。血樣凝集30分鐘后,1,000 ×g離心10分鐘。吸取血清樣本之后即刻檢測(cè),或者分裝,-20℃以下貯存。
血漿樣本
EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝收集血漿樣本。1,000 ×g離心30分鐘收集樣本。即刻檢測(cè),或者分裝,-20℃以下貯存。
本試劑盒可能適用于其它生物學(xué)樣本。細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清和血漿已經(jīng)過(guò)驗(yàn)證。
注意:檢測(cè)前,樣本中可見的沉淀必須去除。不要使用嚴(yán)重溶血或高血脂的樣本。樣本應(yīng)分裝并貯存于-20℃,以避免IGF-1活性的丟失。如果在24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)。樣本可以存放在2 -8℃。避免樣本的反復(fù)凍融。在檢測(cè)前,冷凍樣本應(yīng)緩慢地恢復(fù)至室溫,輕柔地混勻。
2. 樣本準(zhǔn)備
正常小鼠血清血漿樣本需要1000倍稀釋。推薦兩步稀釋。第一步,10 μl樣本+ 190 μl 1×檢測(cè)緩沖液。第二步,10 μl第一步稀釋的混合樣本+ 490 μl 1×檢測(cè)緩沖液。
正常大鼠血清血漿樣本需要4000倍稀釋。推薦兩步稀釋。第一步,10 μl樣本+ 490 μl 1×檢測(cè)緩沖液。第二步,10 μl第一步稀釋的混合樣本+ 790 μl 1×檢測(cè)緩沖液。
3. 試劑準(zhǔn)備
檢測(cè)前請(qǐng)將所有的試劑、樣本恢復(fù)至室溫。
如果濃縮的試劑出現(xiàn)結(jié)晶,37℃溫浴,直至結(jié)晶全部溶解。
1×洗液
吸取20×濃縮洗液50 ml至1 L的量筒,加蒸餾水至1,000 ml,輕輕混勻,避免泡沫。轉(zhuǎn)移至干凈瓶?jī)?nèi)。2-25℃貯存,1×洗液可穩(wěn)定保存30天。
1×檢測(cè)緩沖液
吸取10×濃縮檢測(cè)緩沖液15ml至250 ml量筒,加蒸餾水至150 ml,輕輕混勻,避免泡沫。2-8℃貯存,1×檢測(cè)緩沖液可穩(wěn)定保存30天。
檢測(cè)抗體
稀釋前充分混勻。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和待檢樣本的數(shù)量,用1×檢測(cè)緩沖液按1:100稀釋濃縮的檢測(cè)抗體。
注意:請(qǐng)?jiān)?/span>30分鐘內(nèi)使用稀釋后的檢測(cè)抗體。
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素
稀釋前充分混勻。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和待檢樣本的數(shù)量,用1×檢測(cè)緩沖液按1:100稀釋濃縮的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素。
注意:請(qǐng)?jiān)?/span>30分鐘內(nèi)使用稀釋后的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素。
樣本稀釋
如果樣本需要稀釋,請(qǐng)用試劑盒提供的1×檢測(cè)緩沖液稀釋血清/血漿樣本,用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞培養(yǎng)上清。
IGF-1標(biāo)準(zhǔn)品
開蓋前短暫離心,用蒸餾水重溶IGF-1標(biāo)準(zhǔn)品,重溶體積標(biāo)注于IGF-1標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)簽上。輕柔地渦旋震蕩,確保充分混勻,重溶后標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為2,000 pg/ml。重溶后靜置10 -30分鐘。稀釋前充分混勻。
請(qǐng)使用聚丙烯管進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品稀釋。
血清/血漿樣本標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:
取230 μl濃縮的IGF-1標(biāo)準(zhǔn)品,加入230 μl1×檢測(cè)緩沖液,作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的最高濃度(1,000 pg/ml)。在每一個(gè)試管中加入230 μl1×檢測(cè)緩沖液。使用高濃度標(biāo)準(zhǔn)品做1:1系列稀釋。每次移液時(shí),請(qǐng)確保充分混勻。以1×檢測(cè)緩沖液作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的零濃度。
細(xì)胞培養(yǎng)上清樣本標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:
取230 μl濃縮的IGF-1標(biāo)準(zhǔn)品,加入230 μl細(xì)胞培養(yǎng)基,作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的最高濃度(1,000 pg/ml)。在每一個(gè)試管中加入230 μl細(xì)胞培養(yǎng)基。使用高濃度標(biāo)準(zhǔn)品做1:1系列稀釋。每次移液時(shí),確保充分混勻。以細(xì)胞培養(yǎng)基作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的零濃度。
4.檢測(cè)步驟
檢測(cè)之前請(qǐng)將所有的試劑、樣本平衡至室溫。
1) 準(zhǔn)備好所有需要的試劑及工作濃度標(biāo)準(zhǔn)品。
2) 將不需要的板條拆卸下來(lái),放回裝有干燥劑的鋁箔袋,重新封好封口。
3) 浸泡酶標(biāo)板:加入300 μl1×洗液靜置浸泡30秒。為了獲得理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果浸泡是必須的。棄掉洗液之后,在吸水紙上將微孔板拍干。洗板完成之后,請(qǐng)立即使用微孔板,不要讓微孔板干燥。
4) 加標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品孔加入100 μl2倍倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品??瞻卓准尤?/span>100 μl 1×檢測(cè)緩沖液(血清/血漿樣本)或培養(yǎng)基(細(xì)胞培養(yǎng)上清樣本)。
5) 加加樣本:血清/血漿:樣本孔加入100 μl預(yù)稀釋樣本。細(xì)胞培養(yǎng)上清:樣本孔加入100 μl細(xì)胞培養(yǎng)上清。(樣本稀釋請(qǐng)參考第6頁(yè)“樣本準(zhǔn)備”)。保證步驟4、5連續(xù)加樣,不要間斷。加樣過(guò)程在15分鐘內(nèi)完成。
6) 孵育:使用封板膜封板。300轉(zhuǎn)/分鐘振蕩,室溫孵育2小時(shí)。
7) 洗滌:棄掉液體,每孔加入300 μl洗液洗板,洗滌6次。每次洗板,在吸水紙上拍干。為獲得理想的實(shí)驗(yàn)性能,必須徹底移除殘留液體。
8) 加檢測(cè)抗體:每孔加入100 μl稀釋的檢測(cè)抗體(1:100稀釋)。使用封板膜封板。300轉(zhuǎn)/分鐘振蕩,室溫孵育1小時(shí)。
9) 洗滌:重復(fù)步驟7。
10) 加酶孵育:每孔加入100 μl稀釋的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素(1:100稀釋)。使用新的封板膜封板。300轉(zhuǎn)/分鐘振蕩,室溫孵育45分鐘。
11) 洗滌:重復(fù)步驟7。
12) 加底物顯色:每孔加入100 μl顯色底物TMB,避光,室溫孵育5 -30分鐘。
13) 加終止液:每孔加入100 μl終止液。顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。如果顏色呈現(xiàn)綠色或者顏色的變化明顯不均勻,請(qǐng)輕輕叩擊板框,充分混勻。
14) 檢測(cè)讀數(shù):在30分鐘之內(nèi),使用酶標(biāo)儀進(jìn)行雙波長(zhǎng)檢測(cè),測(cè)定450 nm最大吸收波長(zhǎng)和570 nm或630 nm參考波長(zhǎng)下的OD值。校準(zhǔn)后的OD值為450 nm的測(cè)定值減去570 nm或630 nm的測(cè)定值。僅使用450 nm測(cè)定會(huì)導(dǎo)致OD值偏高,并且準(zhǔn)確度降低。
注意事項(xiàng)
1) 所有的化學(xué)試劑理應(yīng)被認(rèn)為具有潛在危害。
2) 推薦只有經(jīng)過(guò)良好實(shí)驗(yàn)室培訓(xùn)的工作人員方可操作本試劑盒。操作時(shí)請(qǐng)佩戴合適的防護(hù)設(shè)施,例如白大衣、乳膠手套、安全眼鏡等。
3) 請(qǐng)避免試劑接觸皮膚和眼睛。如不慎接觸,請(qǐng)立即用大量清水清洗。
4) 試劑盒中的終止液為酸性溶液,在使用終止液時(shí),請(qǐng)佩戴防護(hù)服,及防護(hù)眼睛、手及面部的設(shè)施。
5) 本試劑盒用于科學(xué)研究,不能用于診斷治療。
6) 請(qǐng)不要使用其他批號(hào)或其他來(lái)源的試劑替代本試劑盒中的試劑。
7) 請(qǐng)不要使用過(guò)期的試劑。
8) 在試劑盒的貯存或孵育過(guò)程請(qǐng)避免強(qiáng)光照射。
9) 在操作試劑盒或處理樣本的區(qū)域請(qǐng)不要飲食。
10) 不要讓試劑或樣本接觸皮膚和粘膜。
11) 在操作試劑盒或處理樣本時(shí)請(qǐng)佩戴乳膠或一次性手套。
12) 顯色底物避免與氧化試劑和金屬接觸。
13) 避免氣溶膠的產(chǎn)生。
14) 為了避免微生物的污染,以及試劑與樣本間的交叉污染,請(qǐng)使用一次性槍頭。
15) 使用干凈的容器配制試劑。
16) 暴露于酸性環(huán)境會(huì)抑制結(jié)合。
17) 試劑的準(zhǔn)備必須使用蒸餾水或去離子水。
18) 顯色底物在使用之前必須平衡至室溫。
19) 樣本可能含有傳染性病原體,處理樣本和可能的污染材料的首選方法是121.5℃,最少1小時(shí)。
20) 液體廢棄物的處理。不含酸的液體廢棄物,加入1.0 %的次氯酸鈉,浸泡30分鐘。含酸的液體廢棄物,請(qǐng)先中和,再加入次氯酸鈉。
普利萊ELISA試劑盒產(chǎn)品列表:
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