NAD激酶（NADK）微量法檢測(cè)試劑盒
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品牌 谷研
保質(zhì)期 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
含量 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
是否危險(xiǎn)化學(xué)品 否
規(guī)格 100管/48樣
貨號(hào) GOY-01S6323
檢測(cè)方法 微量法
分類(lèi) 輔酶Ⅰ系列
用途 僅供科研使用
包裝 盒
商品介紹
基本信息：
產(chǎn)品名稱(chēng)：NAD激酶（NADK）微量法檢測(cè)試劑盒
測(cè)試方法:微量法
規(guī)格 : 100管/48樣
貨號(hào)：GOY-01S6323
分類(lèi)：輔酶Ⅰ系列
測(cè)定意義：
輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環(huán)（TCA）的主要?dú)涫荏w，生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時(shí)，形成大量的ROS，同時(shí)NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過(guò)這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說(shuō)明細(xì)胞呼吸耗氧量較高，處于過(guò)氧化狀態(tài)。此外，NADH/NAD+比值升高也可糖酵解和TCA循環(huán)。另外，NAD+降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。
測(cè)定原理
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，NADH通過(guò)PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍(lán)（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測(cè)吸光值；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進(jìn)一步采用MTT還原法檢測(cè)。
需自備的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍(lán)綠色之前均可使用。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
測(cè)定步驟：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到510 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 對(duì)照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。
6. 測(cè)定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。
其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管，測(cè)定管和對(duì)照管每個(gè)樣均需做。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄因子6抗體，
精子相關(guān)蛋白16抗體，現(xiàn)貨直銷(xiāo)，請(qǐng)?jiān)儍r(jià)
甘蔗SCYLV抗體，
Sema6A抗體，現(xiàn)貨直銷(xiāo)，請(qǐng)?jiān)儍r(jià)
人α抗胰糜蛋白酶(AACT)elisa檢測(cè)試劑盒 用途：僅供科研
 小鼠雌二醇(E2)ELISA試劑盒 用途：僅供科研
 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SP-B)elisa檢測(cè)試劑盒
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 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D(SP-D)elisa檢測(cè)試劑盒 用途：僅供科研
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CD2F-10抗體，現(xiàn)貨直銷(xiāo)，請(qǐng)?jiān)儍r(jià)
100A13抗體，現(xiàn)貨直銷(xiāo)，請(qǐng)?jiān)儍r(jià)
染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白1抗體，現(xiàn)貨直銷(xiāo)，請(qǐng)?jiān)儍r(jià)
磷酸化染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白質(zhì)１抗體，
型豬鏈球菌菌體蛋白抗體，現(xiàn)貨直銷(xiāo)，請(qǐng)?jiān)儍r(jià)
S腺苷L-同型半胱氨酸水解酶抗體，
磷酸化核突觸蛋白α抗體，現(xiàn)貨直銷(xiāo)，請(qǐng)?jiān)儍r(jià)
乙酰輔酶A蛋白1抗體，
突觸泡蛋白2A抗體，現(xiàn)貨直銷(xiāo)，請(qǐng)?jiān)儍r(jià)
人抑瘤素M(OSM)elisa檢測(cè)試劑盒
基質(zhì)金屬蛋白酶因子3(TIMP-3)elisa檢測(cè)試劑盒
基質(zhì)金屬蛋白酶因子4(TIMP-4)elisa檢測(cè)試劑盒
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癌胚抗原(CEA/CD66)elisa檢測(cè)試劑盒
 人甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)elisa檢測(cè)試劑盒
 人卵巢癌標(biāo)志物CA25elisa檢測(cè)試劑盒 用途：僅供科研
細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smad-1抗體，
突觸融合蛋白1抗體，
肺表面活性蛋白D抗體，
可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2抗體，
線(xiàn)粒體二羧酸載體蛋白20抗體，現(xiàn)貨直銷(xiāo)，
長(zhǎng)鏈脂肪酸蛋白1抗體，
轉(zhuǎn)錄蛋白Sin3b抗體，現(xiàn)貨直銷(xiāo)，
進(jìn)口鞘磷脂合成酶1抗體，現(xiàn)貨直銷(xiāo)，
NAD激酶（NADK）微量法檢測(cè)試劑盒磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄因子1抗體，現(xiàn)貨直銷(xiāo)，請(qǐng)?jiān)儍r(jià)
操作步驟：
1. 樣品的準(zhǔn)備：
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類(lèi)常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類(lèi)常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（P1511）測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測(cè)定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋?zhuān)礊榉磻?yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說(shuō)明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。
3. 樣品測(cè)定：
a. 參考下表使用96孔板加入各個(gè)組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對(duì)照孔。
注意：加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液后反應(yīng)即會(huì)開(kāi)始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液的時(shí)間先后差異而導(dǎo)致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說(shuō)明：孵育25至35分鐘檢測(cè)出來(lái)的SOD活力無(wú)顯著差異，但為檢測(cè)結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測(cè)定吸光度。如無(wú)450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長(zhǎng)作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。
4. 樣品中總SOD活力的計(jì)算：
a. 百分率的計(jì)算：
參考如下計(jì)算公式計(jì)算百分率：
百分率＝[(A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2)－(A樣品－A空白對(duì)照3)] / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × 100%
如果沒(méi)有設(shè)置空白對(duì)照3，則可以把計(jì)算公式簡(jiǎn)化為：
百分率＝(A空白對(duì)照1－A樣品) / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × 100%
如果計(jì)算出來(lái)的百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測(cè)定。盡量使樣品的百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測(cè)定出來(lái)的百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測(cè)定出來(lái)的百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測(cè)樣品。
b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中百分率為50% 時(shí)，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。

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