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堿性磷酸酶(AKP/ALP)可見分光光度法檢測試劑盒
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基本信息:
產(chǎn)品名稱:堿性磷酸酶(AKP/ALP)可見分光光度法檢測試劑盒
測試方法: 可見分光光度法
規(guī)格 : 50管/24樣
貨號(hào):GOY-01S6545
分類:酯酶系列
測定意義:
AKP/ALP是一種含鋅的糖蛋白酶,在堿性環(huán)境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。AKP/ALP廣泛分布于人體各臟器中,以肝臟為主。
測定原理:
在堿性環(huán)境中,AKP/ALP催化磷酸苯二鈉生成游離酚;酚與4-氨基安替比林和鐵反應(yīng)紅色亞醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通過測定510 nm吸光度增加速率,來計(jì)算AKP活性。
自備儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、1 mL玻璃比色皿/96孔板、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:液體×1瓶,4℃避光保存,未變成藍(lán)綠色之前均可使用。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體×1支(EP管中),2 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。
測定步驟:
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到510 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 空白管:取EP管,加入4μL蒸餾水,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管:取EP管,加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 對照管:取EP管,加入4μL上清液,40μL蒸餾水,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A測定管。
6. 測定管:取EP管,加入4μL上清液,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A測定管。
其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管,測定管和對照管每個(gè)樣均需做。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。產(chǎn)品僅用于科研
小鼠α1干擾素(IFN-α1)ELISA試劑盒 ,英文名: IFN-α1 ELISA Kit
大鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢ)ELISA檢測試劑盒RatprocollagenⅢN-terminalpeptide,PⅢELISAKit 96T/48T
人I 型膠原蛋白(COL I)免疫試劑盒 Human Collagen Type I,COL I ELISA Kit
英文名稱MouseFGF9ELISAKit小鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子9FGF9規(guī)格:96T/48T
冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-4(CASPASE-4)活性原位熒光染色檢測試劑盒50次
Rat6-keto-prostaglandinF1a,6-K-PGF1aELISA試劑盒大鼠6同前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
鴨子胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human ai Saccharomyces cerevisiae aibody (ASCA) ELISA Kit 人抗釀酒酵母抗體(ASCA)ELISA試劑盒
HumanMelatonin,MTELISAKit 人褪黑素(MT)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforACV-RAb(Ratai-ActivinAreceptoraibody,ACV-RAb)ELISAKit大鼠活化素A受體抗體規(guī)格:48T/96T
血液總脂肪酶(lipase)活性比色法定量檢測試劑盒20次
Mouseproliferatingcellnuclearaigenaibody,PCNAELISAKit小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
KP(Human kaliuretic peptide) ELISA Kit 人利尿肽Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-HA tag HA tag標(biāo)簽抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MLF
ADAM8(Human A Disintegrin And Metalloprotease 8) ELISA Kit 人解整合素樣金屬蛋白酶8 96T
phospho-RAC1(Ser71) 英文名稱: 0酸化細(xì)胞遷移誘導(dǎo)因子5抗體 0.1ml
Claudin 7 英文名稱: 緊密連接蛋白7抗體 0.2ml
Anti-HA tag HA tag標(biāo)簽抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
堿性磷酸酶(AKP/ALP)可見分光光度法檢測試劑盒Anti-Tat/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞酪氨酸轉(zhuǎn)氨酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
IRS P53 (Insulin receptor substrate P53)(多肽) Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
臂板蛋白3A抗體 Anti-Sema3A 0.2ml
Snake poison Protein 英文名稱: 蛇毒蛋白抗體(中華眼鏡蛇) 0.2ml
ECH1 英文名稱: 烯酰輔酶A水合酶1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-MEF2C(Ser396) 0酸化肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2C抗體 規(guī)格 0.1ml
IRS P53 (Insulin receptor substrate P53)(多肽) Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
操作步驟:
1. 樣品的準(zhǔn)備:
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
3. 樣品測定:
a. 參考下表使用96孔板加入各個(gè)組分,注意設(shè)置樣品孔和各種空白對照孔。
注意:加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液后反應(yīng)即會(huì)開始,可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液的時(shí)間先后差異而導(dǎo)致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說明:孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異,但為保證檢測結(jié)果的一致性,推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片,可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進(jìn)行雙波長測定。
4. 樣品中總SOD活力的計(jì)算:
a. 抑制百分率的計(jì)算:
參考如下計(jì)算公式計(jì)算抑制百分率:
抑制百分率=[(A空白對照1-A空白對照2)-(A樣品-A空白對照3)] / (A空白對照1-A空白對照2) × 100%
如果沒有設(shè)置空白對照3,則可以把計(jì)算公式簡化為:
抑制百分率=(A空白對照1-A樣品) / (A空白對照1-A空白對照2) × 100%
如果計(jì)算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ,則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的抑制百分率偏高,則需適當(dāng)稀釋樣品;如果測定出來的抑制百分率偏低,則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測樣品。
b. SOD酶活力單位的定義:在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時(shí),反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位 (unit)。注意:SOD的活力單位的定義方式有很多種,不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。