基本信息：
產(chǎn)品名稱：堿性磷酸酶（AKP/ALP）可見分光光度法檢測試劑盒
測試方法: 可見分光光度法
規(guī)格 : 50管/24樣
貨號(hào)：GOY-01S6545
分類：酯酶系列
測定意義：
AKP/ALP是一種含鋅的糖蛋白酶，在堿性環(huán)境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。AKP/ALP廣泛分布于人體各臟器中，以肝臟為主。

測定原理：

在堿性環(huán)境中，AKP/ALP催化磷酸苯二鈉生成游離酚；酚與4-氨基安替比林和鐵反應(yīng)紅色亞醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通過測定510 nm吸光度增加速率，來計(jì)算AKP活性。

自備儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、1 mL玻璃比色皿/96孔板、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍(lán)綠色之前均可使用。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
測定步驟：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到510 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 對照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
6. 測定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管，測定管和對照管每個(gè)樣均需做。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。產(chǎn)品僅用于科研
小鼠α1干擾素(IFN-α1)ELISA試劑盒 ，英文名： IFN-α1 ELISA Kit

大鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢ)ELISA檢測試劑盒RatprocollagenⅢN-terminalpeptide,PⅢELISAKit 96T/48T

人I 型膠原蛋白(COL I)免疫試劑盒 Human Collagen Type I,COL I ELISA Kit

英文名稱MouseFGF9ELISAKit小鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子9FGF9規(guī)格：96T/48T

冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-4(CASPASE-4)活性原位熒光染色檢測試劑盒50次

Rat6-keto-prostaglandinF1a,6-K-PGF1aELISA試劑盒大鼠6同前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
鴨子胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human ai Saccharomyces cerevisiae aibody (ASCA) ELISA Kit 人抗釀酒酵母抗體(ASCA)ELISA試劑盒

HumanMelatonin,MTELISAKit 人褪黑素(MT)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforACV-RAb(Ratai-ActivinAreceptoraibody,ACV-RAb)ELISAKit大鼠活化素A受體抗體規(guī)格：48T/96T

血液總脂肪酶(lipase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Mouseproliferatingcellnuclearaigenaibody,PCNAELISAKit小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
KP(Human kaliuretic peptide) ELISA Kit 人利尿肽Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-HA tag HA tag標(biāo)簽抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MLF1/2/3 髓細(xì)胞性白血病蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml

ADAM8(Human A Disintegrin And Metalloprotease 8) ELISA Kit 人解整合素樣金屬蛋白酶8 96T

phospho-RAC1(Ser71) 英文名稱： 0酸化細(xì)胞遷移誘導(dǎo)因子5抗體 0.1ml

Claudin 7 英文名稱： 緊密連接蛋白7抗體 0.2ml

Anti-HA tag HA tag標(biāo)簽抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
堿性磷酸酶（AKP/ALP）可見分光光度法檢測試劑盒Anti-Tat/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞酪氨酸轉(zhuǎn)氨酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

IRS P53 (Insulin receptor substrate P53)(多肽) Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

臂板蛋白3A抗體 Anti-Sema3A 0.2ml

Snake poison Protein 英文名稱： 蛇毒蛋白抗體(中華眼鏡蛇) 0.2ml

ECH1 英文名稱： 烯酰輔酶A水合酶1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-MEF2C(Ser396) 0酸化肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2C抗體 規(guī)格 0.1ml

IRS P53 (Insulin receptor substrate P53)(多肽) Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
操作步驟：
1. 樣品的準(zhǔn)備：
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
3. 樣品測定：
a. 參考下表使用96孔板加入各個(gè)組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對照孔。
注意：加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液后反應(yīng)即會(huì)開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液的時(shí)間先后差異而導(dǎo)致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進(jìn)行雙波長測定。
4. 樣品中總SOD活力的計(jì)算：
a. 抑制百分率的計(jì)算：
參考如下計(jì)算公式計(jì)算抑制百分率：
抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果沒有設(shè)置空白對照3，則可以把計(jì)算公式簡化為：
抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果計(jì)算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測樣品。
b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時(shí)，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。