博爾森-BIOESN phi29 DNA聚合酶 BES2006DP
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上海博爾森生物科技有限公司

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品牌 博爾森-BIOESN
規(guī)格 1000U/20KU
貨號(hào) BES2006DP
應(yīng)用 超強(qiáng)鏈置換能力
保存條件 -20°C可保存2年
商品介紹


phi29 DNA 聚合酶是從嗜熱脂肪芽孢桿菌Bacillus subtilis噬菌體phi29中克隆出的嗜溫（30℃）DNA聚合酶，它具有特殊的鏈置換和連續(xù)合成特性，可連續(xù)合成長(zhǎng)達(dá)70kb的DNA片段。phi29 2.0 DNA 聚合酶是phi29 DNA聚合酶的改造體，并經(jīng)多次純化分離而得。在保留了phi29 DNA聚合酶的鏈置換、連續(xù)合成特性（>70kb）的基礎(chǔ)上，提高了滾環(huán)擴(kuò)增的反應(yīng)溫度，phi29 2.0 DNA 聚合酶可以在42℃條件下持續(xù)的進(jìn)行DNA合成（而phi29 DNA 聚合酶在此溫度下反應(yīng)活性很低）。
這種高溫的反應(yīng)特性，具有以下優(yōu)勢(shì)：（1）在NGS測(cè)序中，其提升了高GC含量、回文結(jié)構(gòu)等復(fù)雜模板的延伸能力，使得NGS的覆蓋度更均一，降低測(cè)序所需深度；（2）高溫的反應(yīng)條件，提升了WGA產(chǎn)物的合成量（2-5倍），并縮短擴(kuò)增時(shí)間（1~2h完成建庫(kù)擴(kuò)增）；（3）降低測(cè)序中Gap區(qū)域，提升單細(xì)胞測(cè)序的數(shù)據(jù)質(zhì)量和完整度；（4）降低非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物；（5）提升MDA/RCA等實(shí)驗(yàn)的擴(kuò)增性能和特異性。
此外，該酶仍然具有很強(qiáng)的3’→5’外切酶校讀功能，合成的DNA片段保真性高。該酶的外切酶活性較強(qiáng)，因此合成過(guò)程中引物需要3’端硫代修飾，以降低外切活性對(duì)引物的切割效應(yīng)。

主要特征

  • 超強(qiáng)鏈置換能力
  • 連續(xù)合成能力
  • 擴(kuò)增的高保真性

應(yīng)用

  • DNA恒溫滾環(huán)擴(kuò)增
  • 需強(qiáng)鏈置換和DNA連續(xù)合成的反應(yīng)
  • 質(zhì)?？焖?gòu)?fù)制
  • 高保真快速?gòu)?fù)制

儲(chǔ)存

-20℃可保存3年。

注意事項(xiàng)

1. 1×phi29 Buffer：50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl2，10 mM (NH4)2S04，4 mM DTT。必要時(shí)可單獨(dú)額外添加終濃度1 mM DTT和0.2 mg/ml BSA，可提高反應(yīng)效率。
2. 65℃ 10min即可使該酶失活。
3. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)類(lèi)型需要，調(diào)整dNTP的濃度100~500 μM。
4. 添加Yeast Pyrophosphatase（貨號(hào)：C5006）可提高DNA產(chǎn)量。
5. 反應(yīng)引物3’端的硫代修飾可避免引物降解。

實(shí)例

用硫代修飾的6N隨機(jī)引物和兩種phi29 DNA聚合酶分別在30°C和42°C對(duì)不同量的pUC57質(zhì)粒進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果如下圖；由圖可見(jiàn)，phi29 2.0 DNA聚合酶在42°C條件下2h即可完成擴(kuò)增，且產(chǎn)量相對(duì)較高。
耐熱phi29 DNA聚合酶

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公司名稱(chēng) 上海博爾森生物科技有限公司
聯(lián)系賣(mài)家 楊柳 （QQ：3597200582）
電話 祹祶祺-祻祲祻祵祺祵祵祲
手機(jī) 祺祷祺祻祻祹祻祺祺祴祶
網(wǎng)址 https://www.bioesn.net/
地址 上海市松江區(qū)
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