前言簡(jiǎn)介
腫瘤壞死因子α是分子量為17.5 kDa,由157個(gè)氨基酸組成的強(qiáng)效淋巴因子,在各種腫瘤細(xì)胞和靶細(xì)胞發(fā)揮著細(xì)胞毒素作用. 腫瘤壞死因子α在炎性前癥發(fā)揮關(guān)鍵作用,并能在患有風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人的骨滑液中檢測(cè)到.它是免疫調(diào)節(jié)作用的初始調(diào)節(jié)者. 腫瘤壞死因子α的分泌是經(jīng)過(guò)嚴(yán)格控制的,由極小量的休眠細(xì)胞分泌,主要為激活細(xì)胞的分泌因子.
原理
此試劑盒運(yùn)用了兩種特異性抗體,洗板后加入TMB底物液顯色,顯色的強(qiáng)度與大鼠腫瘤壞死因子α的量成正比.
 
檢測(cè)范圍
56.25 ～ 3,600 pg/mL
 
預(yù)期用途
 
■此IBL試劑盒能用于大鼠細(xì)胞培養(yǎng)上清中腫瘤壞死因子α的定量檢測(cè)
■重組和天然的大鼠腫瘤壞死因子α都能檢測(cè)
 
試劑盒成分
1  預(yù)包被板:  抗大鼠腫瘤壞死因子α兔子IgG,親合純化             96T
2  酶標(biāo)記抗體:
 (30倍濃縮)HRP標(biāo)記抗大鼠腫瘤壞死因子α兔子IgG,親合純化      0.4mL x 1
3  標(biāo)準(zhǔn)品:      重組大鼠腫瘤壞死因子α                       1.0mL x 2      
4  EIA緩沖液:         含1% BSA, 0.05%吐溫20  BPS 30mL x 1
5  標(biāo)記抗體稀釋液:       含1% BSA, 0.05%吐溫20  BPS 12mL x 1
6  顯色劑:   TMB底物液 15mL x 1
7  終止液:   1N硫酸 12mL x 1
8  濃縮洗滌液:
 (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20  BPS                      50mL x 1
 
 
操作說(shuō)明
1實(shí)驗(yàn)所需器材(但試劑盒沒(méi)有提供)
  酶標(biāo)儀(450nm)          微移液管及其槍頭
  量筒及燒杯             去離子水
  冰箱(4°C)               坐標(biāo)紙(log/log)
  吸水紙                 試管(用于標(biāo)準(zhǔn)品稀釋)
  溫育箱(37°C ± 1°C)
  洗瓶 (用于洗板)
  一次性試劑管(用于濃縮酶標(biāo)記抗體和顯色劑)
 
2準(zhǔn)備

• 洗滌液的準(zhǔn)備

試劑盒的洗滌液是一種40倍濃縮液, 稀釋前,將濃縮液平衡至室溫.用1950 mL去離子水稀釋50 mL的濃縮洗滌液,制成2000mL即用稀釋洗滌液. 置于冰箱內(nèi)可保存2周.

• 酶標(biāo)記抗體的準(zhǔn)備

試劑盒中的標(biāo)記抗體是一種30倍濃縮物,根據(jù)所需量,用標(biāo)記抗體稀釋液稀釋30倍.
示例:
如果你用一條板(8孔),就需800  μL.的標(biāo)記抗體.就用870  μL的標(biāo)記抗體稀釋液稀釋30  μL抗體濃縮液,充分混勻.并每孔各加100 μL
濃縮酶標(biāo)記抗體需稀釋后才能用于實(shí)驗(yàn)
剩余的稀釋標(biāo)記抗體液需密封瓶裝,存于4°C

• 標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備

加1.0mL的去離子水到瓶裝標(biāo)準(zhǔn)品,制成濃度為7,200 pg/mL大鼠腫瘤壞死因子α標(biāo)準(zhǔn)品液

• 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋

準(zhǔn)備8支試管,并每支各加230 μL  EIA緩沖液.稀釋成如下濃度

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